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    供應•▩:invitrogen Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent,lip2000,脂質體2000 貨號: 11668-027(0.75ml) 11668-019(1.5ml) 儲存條件•▩:4℃ 保質期•▩:3年

    Lipofectamine™ 2000轉染試劑是一種陽離子脂質體,在體外可以轉染許多種哺乳動物細胞│₪,對各類細胞系都可提供zui高的轉染效率│₪,具有高效性和操作步驟簡單的優點☁╃╃。脂質體2000其轉染效率以及細胞活性取決於許多實驗因素,如細胞密度╃▩₪╃、脂質體和DNA的濃度╃▩₪╃、脂質體2DNA複合物的作用時間以及是否有其它介質成分如抗生素和血清☁╃╃。

    使用Lipofectamine™ 2000試劑│₪,您可以獲得•▩:
    *在多種細胞系中具有*地轉染效率和較高水平地重組蛋白表達
    *傳輸siRNA的優異效能
    *在有血清存在的情況下可保證轉染效力——轉染後無需更換培養基
    *保證可以用於高通量應用的試劑
    *用於建立穩定細胞系的可靠試劑Lipofectamine™ 2000試劑為大多數細胞提供了zui高的轉染效率和活性☁╃╃。當存在血清或用於進行蛋白表達的細胞系(如COS-7│₪,CHO和293)時│₪,Lipofectamine™ 2000尤為有效│₪,效率可超過90%☁╃╃。

    脂質體2000操作流程     
    事實上Lipofectamine系列產品操作流程都是又快又簡單•▩:稀釋DNA以及Lipofectamine 2000│₪,混合2種稀釋液保溫20分鐘│₪,加入培養細胞中孵育24-96小時檢測結果☁╃╃。下面是Invitrogen提供的詳細流程和注意事項☁╃╃。
    1╃▩₪╃、轉染前一天│₪,胰酶消化細胞並計數│₪,細胞鋪板│₪,使其在轉染日密度為90%☁╃╃。細胞鋪板在0.5ml含血清│₪,不含抗生素的正常生長的培養基中☁╃╃。
    2╃▩₪╃、對於每孔細胞│₪,使用50μl無血清培養基(如OPTI-MEMⅠ培養基)稀釋0.8μg-1.0μg DNA☁╃╃。
    3╃▩₪╃、對於每孔細胞│₪,使用50μl OPTI-MEMⅠ培養基稀釋1μl-3μl LIPOFECTAMINE2000試劑☁╃╃。Lipofectamine 2000稀釋後保溫5分鐘(在30分鐘內同稀釋的DNA混合☁╃╃。保溫時間過長會降低活性☁╃╃。) 注意•▩:即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀釋│₪,細胞也可以使用D-MEM培養☁╃╃。如果D-MEM做為Lipofectamine 2000的稀釋液│₪,必須在5分鐘內同稀釋的DNA混合☁╃╃。
    4╃▩₪╃、混合稀釋的DNA(第2步)和稀釋的Lipofectamine 2000(第3步)☁╃╃。在室溫保溫20分鐘☁╃╃。 注意•▩:溶液可能會混濁│₪,但不會影響轉染☁╃╃。複合物可以在室溫保持6小時穩定☁╃╃。
    5╃▩₪╃、直接將複合物加入到每孔中│₪,搖動培養板│₪,輕輕混勻☁╃╃。注意•▩:如果在無血清條件下轉染│₪,使用含血清的正常生長培養基進行細胞鋪板☁╃╃。在加入複合物前移去生長培養基│₪,替換為0.5ml無血清培養基☁╃╃。
    6╃▩₪╃、在37℃│₪,5%的CO2中保溫24-48小時│₪,無須去掉複合物或更換培養基或者在4-5小時後更換生長培養基也不會降低轉染活性☁╃╃。
    7╃▩₪╃、在細胞中加入複合物24-72小時後│₪,分析細胞抽提物或進行原位細胞染色│₪,檢測報告基因活性☁╃╃。這依賴於細胞型別和啟動子活性☁╃╃。對穩定表達│₪,在開始轉染一天後將細胞傳代至新鮮培養基中│₪,兩天後加入篩選抗生素☁╃╃。進行穩定表達需要數天或數週☁╃╃。
    8╃▩₪╃、對於96孔板培養│₪,不再需要提前一天進行細胞鋪板│₪,而可以直接在平板中製備複合物│₪,然後將細胞懸浮液加入到複合物就可以了│₪,這樣進一步減少了轉染時間☁╃╃。這種改進步驟已經過293-H│₪,293-F│₪,COS-7L和CHO細胞的試驗│₪,同傳統方法相比活性稍低☁╃╃。快捷的步驟和蛋白表達細胞系的高效轉染使得Lipofectamine 2000非常適用於96孔板的高通量轉染│₪,比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達☁╃╃。

    脂質體2000適用細胞株範圍
    不同的轉染試劑所適用的細胞株範圍各不相同☁╃╃。一個實驗室常常會用到不止一種細胞株│₪,甚至是比較特殊的細胞株☁╃╃。一個轉染試劑所適用的細胞株越多│₪,當然越受使用者的歡迎☁╃╃。根據Invotrogen的資料│₪,Lipofectamine2000已經證實可用於高達517種細胞株│₪,覆蓋了相當廣的範圍☁╃╃。要看看Lipofectamine 2000是否適用於你現有的細胞株│₪,可以訪問以下Invitrogen(http://www.invitrogen.com/content.cfm?pageID=9559&fuseaction=CellLines.dsp_searchRange)

    適用的核酸型別和DNA大小
    有的轉染試劑是為siRNA轉染而設計的│₪,有的則是為DNA轉染設計☁╃╃。Lipofectamine 2000可以適用於包括DNA│₪,siRNA,dsRNA, 熒游標記的Oligo, RNA等在內的核酸轉染│₪,這使得Lipofectamine2000適用範圍非常廣泛│₪,無論是基因表達分析的DNA轉染│₪,或者是RNAi│₪,Lipofectamine 2000都能勝任│₪,不需要為不同目的購買不同試劑了☁╃╃。但│₪,zui常用的DNA轉染中有一個DNA大小的問題│₪,太大的質粒不那麼好轉☁╃╃。

    脂質體2000用量
    Lipofectamine 2000用的劑量根據說明書│₪,24孔板轉染每次用2ul左右│₪,1.5ml Lipofectamine 2000大約可做750次24孔板轉染│₪,或者大約150次6孔板轉染☁╃╃。

    注意事項     
    Lipofectamine2000要求細胞鋪板密度較高│₪,以90%-95%為佳│₪,這有助於減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響☁╃╃。Lipofectamine 2000可用於有血清培養基的轉染│₪,並且轉染前後不需要換培養基│₪,使得操作方便了許多│₪,但是要注意製備轉染複合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑│₪,因為血清會影響複合物的形成☁╃╃。
     
    複合物形成後是可以加入血清☁╃╃。這裡要特別注意檢測所用的無血清培養基是否能和Lipofectamine 2000匹配│₪,比如已知CD293, SFMII,VP-SFM就不行☁╃╃。此外還應該留意│₪,如果研究的基因要求比較長的表達時間│₪,比如細胞週期相關基因│₪,或者時細胞表面蛋白│₪,選擇細胞鋪板密較低的轉染試劑│₪,不適合用Lipofectamine 2000☁╃╃。

    對於大多數陽離子脂質體試劑│₪,應最佳化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到zui大的轉染效率☁╃╃。DNA和轉染試劑的比例│₪,通常推薦是1:2或者1:3│₪,最佳化可以從0.5-5之間慢慢試☁╃╃。使用小劑量確定的最佳化條件可以用於進行大劑量的轉染│₪,只要根據培養板表面比例線性增加鋪板細胞的數目╃▩₪╃、陽離子脂質體試劑和DNA量就可以了☁╃╃。
     
    還有轉染的時候培養基中不能新增抗生素☁╃╃。抗生素│₪,比如青黴素和鏈黴素│₪,一般對於真核細胞無毒│₪,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性│₪,使抗生素可以進入細胞☁╃╃。這降低了細胞的活性│₪,導致轉染效率低☁╃╃。所以│₪,在轉染培養基中不能使用抗生素│₪,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用抗生素☁╃╃。這樣│₪,在轉染前就不必潤洗細胞☁╃╃。對於穩定轉染│₪,不要在選擇性培養基中使用青黴素和鏈黴素│₪,因為這些抗生素是GENETICIN選擇性抗生素的競爭性抑制劑☁╃╃。另外│₪,為了保證無血清培養基中細胞的健康生長│₪,使用比含血清培養基更少的抗生素量☁╃╃。
     
    陽離子脂質體應該在4度儲存│₪,要注意避免多次反覆長時間開蓋│₪,因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率☁╃╃。當然還有要注意質粒的質量│₪,質粒的內毒素是轉染的大敵☁╃╃。
     

    本公司還提供以下產品•▩:

    特級胎牛血清(Fetal Bovine Serum, Certified)  gibco16000-044 美洲血源  500ml *
    優級胎牛血清(Fetal Bovine Serum, Qualified)  gibco10099-141 澳洲血源  500ml *

    特級胎牛血清 Fetal Bovine Serum (FBS)  產地:美國  HyClone SH30070.03  500ml *
    胎牛血清(Fetal Bovine Serum) HyClone SV30087.02 南美血源 500ml *
    胎牛血清(Fetal Bovine Serum) HyClone SV30087.01 南美血源 100ml *
    供體馬血清 HyClone SH30074.02   100ml *優質胎牛血清(Fetal Bovine Serum Gold)  PAA A15-151 500ml *

    普通胎牛血清(Fetal Bovine Serum Standard Quality) PAA A15-101 500ml *

    Hyclone 30087.01(南美普通胎牛血清)100ml
    Hyclone 30087.02(南美普通胎牛血清)500ml
    Hyclone 30084.03(澳洲血源)500ml
    Hyclone 30070.03(北美特級胎牛血清)500ml
    Hyclone 30396.03(加拿大血源)500ml
    Gibco 16000-044(美洲血源)500ml
    Gibco 10099-141(澳洲血源)500ml
    Gibco C2027050 (南美烏拉圭)500ml
    Gibco 16141-079 胚胎幹細胞胎牛血清 500ml
    PAA A15-101 德國PAA 普通胎牛血清 500ml
    PAA A15-151 德國PAA 優級胎牛血清 500ml
    美國GIBCO 26400-044 (GIBCO透析型胎牛血清) 500ml
    美國GIBCO 16141-079 (GIBCO幹細胞胎牛血清) 500ml
    美國GIBCO 16140-071 (GIBCO滅活過胎牛血清) 500ml
    美國GIBCO 10439-024 (GIBCO胚胎幹細胞胎牛血清) 500ml
    SH30070.03E (Hyclone幹細胞胎牛血清) 500ml
    SH30068.03(Hyclone活性炭處理胎牛血清) 500ml

    沃比森生物是一家主要從事細胞培相關產品│₪,分子生物學試劑│₪,微生物試劑│₪,,各種動物ELISA試劑盒,生物實驗服務等研發與銷售的高科技生物公司,訂購:│₪,業務諮詢 :

     

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