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  • NC膜▩•▩✘•、 PVDF膜 ▩•▩✘•、尼龍膜之間的區別看完就懂

  • 點選次數▩•↟:293 釋出時間▩•↟:【2022-01-17】
  •   western blot中膜的選擇是實驗成功的關鍵點◕✘·▩₪,Western blot實驗中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC) 和PVDF膜◕✘·▩₪,那NC膜和PVDF膜有什麼區別呢?怎樣才能選擇最恰當的雜交膜進行Western blot實驗呢?
     
      NC膜▩•▩✘•、 PVDF膜 ▩•▩✘•、尼龍膜的特點
     
      尼龍膜是較理想的核酸固相支援物◕✘·▩₪,有多種型別;硝酸纖維素膜(NC膜)是目前應用*的一種固相支援物◕✘·▩₪,便宜;PVDF膜介於二者之間↟◕·。
     
      就結合能力而言▩•↟:尼龍膜結合DNA和RNA能力可達480-600μg/cm2◕✘·▩₪,可結合短至10bp的核酸片段;硝酸纖維素膜(NC膜)結合DNA和RNA能力可達80-100μg/cm2◕✘·▩₪,對於200bp的核酸片段結合能力不強;PVDF膜結合DNA和RNA能力可達125-300μg/cm2↟◕·。
     
      就溫度適應性而言▩•↟:尼龍膜經烘烤或紫外線照射後◕✘·▩₪,核酸中的部分嘧啶鹼基可與膜上的正電荷結合;硝酸纖維素膜(NC膜)依靠疏水性相互作用結合DNA◕✘·▩₪,結合不牢固;PVDF膜結合牢固◕✘·▩₪,耐高溫◕✘·▩₪,特別適合於蛋白印跡↟◕·。
     
      就韌性而言▩•↟:尼龍膜較強;硝酸纖維素膜較脆◕✘·▩₪,易破碎;PVDF膜較強↟◕·。
     
      就重複性而言▩•↟:尼龍膜可反覆用於分子雜交◕✘·▩₪,雜交後◕✘·▩₪,探針分子可經鹼變性被洗脫下來;硝酸纖維素膜(NC膜)不能重複使用;PVDF膜可以重複使用↟◕·。
     
      PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質印跡法中常用的一種固相支援物↟◕·。PVDF膜是疏水性的◕✘·▩₪,膜孔徑有大有小◕✘·▩₪,隨著膜孔徑的不斷減小◕✘·▩₪,膜對低分子量的蛋白結合就越牢固↟◕·。大於20000的蛋白選用0.45um的膜◕✘·▩₪,小於20000的蛋白選用0.2um的膜↟◕·。PVDF膜在使用是需預處理◕✘·▩₪,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團◕✘·▩₪,使其更容易與帶負電的蛋白結合↟◕·。PVDF膜具有較高的機械強度◕✘·▩₪,是印跡法中的理想固相支援物材料↟◕·。
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